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ELISA檢測試劑盒,人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA檢測試劑盒

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產品型號:
HMGB-1
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人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人高遷移率族蛋白 B1(HMGB-1)水平。用純化的人遷移率族蛋白 B1(HMGB-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加高遷移率族蛋白 B1(HMGB-1),再與 HRP 標記的高遷移率族蛋白 B1(HMGB-1)抗體結合形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在
  HMGB-1ELISA檢測試劑盒,人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA檢測試劑盒的詳細資料:


人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA檢測試劑盒實驗原理 
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人高遷移率族蛋白 B1(HMGB-1)水平。用純化的人遷移率族蛋白 B1(HMGB-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加高遷移率族蛋白 B1(HMGB-1),再與 HRP 標記的高遷移率族蛋白 B1(HMGB-1)抗體結合形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高遷移率族蛋白B(HMGB-1)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算品中人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)濃度。 

試劑盒組成 

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1瓶 

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(320µg/L) 0.5ml×1 瓶 

3 酶標包被板 12孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1份 
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個 
標本要求 
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融 

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 

人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA檢測劑盒操作步驟 
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 

160µg/L 5號標準品 150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液 
80µg/L 4號標準品 150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液 
40µg/L 3號標準品 150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液 
20µg/L 2號標準品 150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液 
10µg/L 1號標準品 150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液 
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。 
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用 
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復5次,拍干。 

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。 
7. 溫育:操作同3。 
8. 洗滌:操作同5。 
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分

鐘. 
10. 終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 

計算 
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 

人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA檢測試劑盒注意事項 
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。 

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。 
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 

4. 請每次測定的同時做標準曲線,zui好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。 

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 
6.底物請避光保存。 
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 
9.本試劑不同批號組分不得混用。 
人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA檢測試劑盒保存條件及有效期 
1.試劑盒保存:;2-8℃。 
2.有效期:6個月

產品相關關鍵字: 人ELISA檢測試劑盒 HMGB-1 ELISA檢測試劑盒
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